支原體檢測服務

生物研究支援設施

概覽

細胞培養物中的支原體污染會顯著改變細胞行為及遺傳內容,從而損害表型及基因型實驗結果的可靠性。有鑒於其影響,生物研究支援設施自 2018 年起一直為醫學院的研究實驗室提供每週支原體 PCR 檢測服務。鑑於支原體的高傳播性且難以消除,強烈建議進行定期篩查及適當處理受污染的培養物,以維持實驗的完整性。

樣本提交與製備指南

樣本提交與製備指南
研究人員可以提交各種形式的樣本,如下方指南所述。請仔細遵循準備說明,以確保準確且高效的處理。

⚠️ 嚴格禁止:

嚴格禁止提交含有病原體的樣本、受病原體感染的材料,或任何被分類為生物安全第三級 (BSL-3) 的樣本。

A. 細胞培養基

A1. 在無抗生素培養基中培養樣本細胞至少 3 天 (首選超過 1 週)。在樣本收集前的最後 3 天內請勿更換培養基。

A2. 收集 3 mL 培養基並分裝到兩個 2 mL 微量離心管中 (即每管 1.5 mL;請勿以冷凍管、15 mL 試管或 50 mL 試管提交的樣本將不予接受)。
建議使用的微量離心管 (Axygen MCT-200-C) 可透過生物試劑及耗材採購設施 的網上訂購系統 購買,並用於常規樣本準備。

A3. 將樣品管儲存在 4°C 下直至提交。

B. 提取的 DNA

B1. 將至少 100 µl 經提取的 DNA 分裝在一個 1.5 mL 微量離心管中。宿主 DNA 的濃度不重要。

B2. 將樣品管儲存在 -20°C 下直至提交。

C. 表面棉拭子

C1. 棉拭子可用於檢查工作表面 (例如培養箱、生物安全櫃) 上是否存在支原體。

C2. 在受檢區域表面進行拭抹,然後將棉拭子放回裝有 3 mL PBS 的樣品管中。

C3. 將樣本儲存在 4°C 下,並在提交前分裝至 2 mL 微量離心管中。

  1. 請在樣品管上清晰標註「您的姓名縮寫 – 樣本編號」。請確保同一樣本的兩個試管標籤完全相同。
    例子:
    如果陳大文 (CHAN, Tai Man) 提交 3 個樣本,樣本請標註為:CTM-1、CTM-2、CTM-3 — 每個樣本一式兩份 (即每個樣本兩管),總共 6 管。
  2. 根據《支原體篩查服務用戶標準操作流程》在 PPMS 系統上提交您的篩查訂單。
  3. 將您的樣品管放入密封袋中,並附上一張清晰註明以下內容的紙條:
    1. 用戶姓名
    2. 首席研究員 (PI) 姓名
    3. 訂單編號
  4. 將密封袋提交至位於實驗樓 L6-01 的樣本提交冰盒。
  5. 將您的提交正確記錄在現場提供的記錄簿中

⚠️ 重要事項:

樣本提交袋中若沒有正確標註的紙條,將不予處理。

  1. 泛組學科研中心 (CPOS) 員工接收到您的樣本提交後,確認電郵將發送至您在 PPMS 註冊郵箱。

樣本提交時間表

樣本可於每星期二上午 10:00 至下午 5:00 之間提交至實驗樓 L6-01 門外的冰盒。

⚠️ 請注意:

在星期二、星期三或星期四包含公眾假期的星期內,將不進行任何測試。

香港天文台發布惡劣天氣警告可能會影響預定的測試。請致電 3917 9442 或發送電郵至 bioresearch.cpos@hku.hk 聯繫 CPOS 以獲取最新資訊。

可以從以下日曆查看詳細時間表:

支原體篩查服務時間表

測定參考文獻: 支原體篩查參考文獻

支原體清除建議程序

支原體測試呈陽性的樣本:

如果確認細胞培養物受到支原體污染,強烈建議丟棄或高壓滅菌所有相關的培養物及試劑,以防進一步擴散。

隨後,應對細胞培養設備及表面 (包括生物安全櫃及培養箱) 進行消毒及滅菌,以消除任何殘留的支原體污染痕跡。

在受污染細胞株不可替代的特殊情況下,可考慮使用抗生素治療以去除支原體

  • 如果由於存在抗 Plasmocin® 的支原體而導致 Plasmocin® 無法在 2 週內清除支原體,則建議使用來自 InvivoGen 的 Plasmocure™(目錄編號:ant-pc):
    https://www.invivogen.com/plasmocure

⚠️ 重要注意事項:

  • 由於某些支原體株可能具有抗生素抗性,因此不保證清除成功。
  • 抗生素的細胞毒性作用可能會導致培養物損失。

除非絕對必要,否則應丟棄受感染的培養物。如果進行清除:

  • 經處理的培養物應重新提交篩查:
    • 於抗生素治療後
    • 隨後幾個月以確認持續清除

預防支原體污染

除了一般的除菌技術外,可考慮使用支原體預防劑來預防支原體污染。

常規支原體檢測對於監測細胞培養物及實現及時干預至關重要。如有任何關於支原體篩查服務的查詢請聯繫 bioresearch.cpos@hku.hk 或致電 3917 7555。